Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程里面逐渐扩展

从第一次显现出呼吸道自身病原体到显现出1标准型白血病临床研究患者的成效不下在儿童时期就有很好的阐述，多个呼吸道自身病原体中性的儿童中的有70%在血清转换后10年内患白血病，而随访15年的儿童这一数目减少到84%。相对来说之下，占临床研究1标准型白血病一半以上的标准型1标准型白血病的发病机制还没有得到充分的研究成果。

越来越多的人开始用作有系统管控系统来概念1标准型白血病的成效：有机体在显现出多种呼吸道自身病原体时离开第1前期，显现出血糖异常时离开第2前期，显现出患者时离开第3前期。一些多发呼吸道自身病原体中性的有机体，在1期和2期，成效较慢，并转型为发病的1标准型白血病。我们前阐述了一三组在首次检查到多种呼吸道自身病原体样品后仅仅10年无白血病的较慢成效者，这三组病症人数少，但构造非常明确。随后，我们发现呼吸道自身抗原特异性CD8+T细胞核分裂反应在成效较快的病症中的前提不长期以来存在，但在近期发病和长期以来长期以来存在的白血病病症中的很容易检查到。这可能表明，与成效病症相对来说，这些病症自身致病的抑制增强。

早期研究成果表明，尽管抑制性T细胞核分裂(Treg)数目正常，但白血病病症长期以来存在一些系统瑕疵，其中的包括对IL-2的反应能力降低。此外，白血病病症中的的波动CD4+T细胞核分裂可能对抑制更具抵抗性，平庸为波动T细胞核分裂的诱导减弱，自然导致的Treg和体外导致的诱导Treg，以及抗原经历的CD4+T细胞核分裂中的IL-2反应减弱。本研究成果的目的是阐述了CD4+抑制性T细胞核分裂(Treg)在一小群极较快成效者中的的构造，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访等待时间为18-32年。

方法：BOX研究成果是一项以人群基础上的纵向研究成果，在21岁以下确诊的病症亲属中的检查1标准型白血病的危险因素。我们前阐述了长期以来较快成效者的构造，他们依然多重呼吸道自身病原体中性超过10年，但没有显现出白血病的临床研究患者，慢性或非来性功能血栓。随后，10名继续依然无白血病并愿意提供大量血液样品的较快成效者纳入T和B细胞核分裂系统归纳。在目前的研究成果中的，8名慢成效者(SP三组)，中的位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的呼吸道自身病原体中性。所有的举例来说都西北面1标准型白血病成效的1期，尽管一些人随后失去了呼吸道自身病原体对某些抗原的中性反应，然而，一名病症已经西北面2期仅仅6年，但没有显现出临床研究患者，一名病症被诊断为白血病，该患者72岁，在采集实验样品时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据归纳中的对该NADPH来进行了除此以外审计。受控外周血单个核分裂细胞核分裂(PBMCs)，采用多表达式流式细胞核分裂术和T细胞核分裂诱导试验审计NADPH中的Treg的高频不下、表标准型和系统。用作FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、相关联和回归)来进行无监督聚类归纳，审计Treg表标准型。

结果：与肥胖NADPH相对来说，来自慢成效体的失忆CD4+T细胞核分裂的监督聚类表明，作用于命的失忆CD4+ Treg高频不下减少，与糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白(GITR)表达出来减少有关。一名HbA1c升高的病症与成效较快者和冗余的对照三组相对来说，Treg曲谱有所完全相同。系统新发现，与肥胖NADPH相对来说，来自较快成效体的Treg介导的CD4+波动T细胞核分裂诱导相比破损。平庸为对波动CD4+T细胞核分裂CD25和CD134表达出来的诱导减少。

图1 集中的表标准型新发现，CD4+Treg亚标准型在慢成效链表中的减少。由FlowSOM生成的Treg一楼，汇聚在来自所有NADPH的活命CD4+CD45RA -细胞核分裂上。根据上面物表达出来鉴定出10个元簇:失忆T细胞核分裂_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;失忆T cell_4;CD49b失忆T细胞核分裂;HLA-DR + GITR +失忆T细胞核分裂;存储器Treg_1;存储器Treg_2;存储器Treg_3;和存储器Treg_4。(a)用作9个完全相同Treg上面生成的10个元簇的MST。每个节点代表一个空降兵(100个空降兵)，更大的元空降兵(10个元空降兵)在节点三组外面上色。每个节点中的的饼图暗示单个上面的表达出来级别。(b)每个元聚类的热图，以表明整体上面表达出来。(c, d)为HD三组(c)和SP三组(d)生成图，以及FlowSOM比对的每个元簇的覆盖层。(e-l)一般来说金属量为每个metacluster木箱本站图(金属量> 0.05%)确定为HD和SP三组:存储器Treg_2 (e),存储器Treg_3 (f),存储器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +失忆T细胞核分裂(h)、失忆T cell_1(i),失忆T cell_2 (j),失忆T cell_3 (k) n d CD49b失忆T细胞核分裂(l)。浅蓝色边框代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon选取符号秩检验。此键适用于图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

图2 用作CITRUS的预测模标准型证实，Treg高频不下的减少是成效较快的logo。分级离子通道(a - f)和柑橘归纳(g-k)比较SP举例来说和冗余的HD举例来说在CD4+CD45RA−T细胞核分裂上的相似之处。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的代表性图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表达出来来进行受控，模拟FlowSOM群体。(b) HD(网纹)和SP(虎纹)三组以及NADPHSP 606(浅蓝色)中的CD25+ cd127的高频不下汇总图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+离子通道子集的木箱本站图;(c) HLA-DRloGITR−(存储器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(存储器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(存储器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+存储器T cell)。(g - i)柑桔簇双螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表达出来强度上色，箭头突出的簇被比对为SP和HD链表之间的完全相同。(j)木箱本站图表明了在SP(虎纹)和HD(灰点)三组中的，CITRUS失忆Treg_3和Treg_4的一般来说金属量(数目)。(k)管控点表明每个簇的表标准型(紫色)和Treg上面一般来说表达出来与背景表达出来(浅蓝色);上列，存储器Treg_3;下面一行，存储器Treg_4。背景与所有其他簇中的上面的表达出来有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon选取符号秩检验

图3 与肥胖献血者相对来说，成效较快者失忆treg的GITR减少。每个失忆CD4+T细胞核分裂元簇(失忆T细胞核分裂_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;CD49b +失忆T细胞核分裂;HLA-DR + GITR +失忆T细胞核分裂;存储器Treg_2;存储器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检查每个表达出来上面的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)链表的表达出来热图(sp606不包括在内)。(c,d)失忆Treg_4元簇中的所有HD(灰色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(浅蓝色)的FlowSOM GITR表达出来串联，表明管控点(c)和汇总图(d)。Wilcoxon选取符号秩和检验，p< 0.07(浅蓝色)所有NADPH包括，p< 0.05(浅蓝色)NADPHSP 606和冗余的HD不包括在测试中的。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中的GITR表达出来，从分级离子通道，从所有HD(灰色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(浅蓝色)串联，表明管控点(e)和汇总图(f) *p< 0.05, Wilcoxon选取符号秩检验

图4 来自较快成效的CD4+ treg细胞核分裂管控波动CD4+T细胞核分裂的能力降低。SP三组用浅蓝色的本站和边框暗示，HD三组用紫色的本站和边框暗示，浅蓝色的本站/边框暗示NADPHsp606。用作CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核分裂来进行分选。CD4+CD25−(这样的话者)被上面为CFSE, Treg按通过观察的数目滴定。用抗CD3 /28微珠活命化细胞核分裂，人才3天后来进行流式细胞核分裂术检查。(a-d)与CD4+这样的话者一般来说应的treg人才(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD这样的话者人才。(a,b,f) CFSE转化(a,e)和CFSE诱导比率(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱导比率。用作中性对照(作用于命的鼓动细胞核分裂不含treg)计算诱导比率。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

图5 波动CD4+T细胞核分裂对较快成效的T细胞核分裂活命化的诱导更恰当。SP三组用浅蓝色的本站和边框暗示，HD三组用紫色的本站和边框暗示，浅蓝色的本站/边框暗示NADPHsp606。用作CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核分裂来进行分选。CD4+CD25−(这样的话者)被cfsel上面，treg按通过观察的数目滴定。用抗CD3 /28微珠活命化细胞核分裂，人才3天后来进行流式细胞核分裂术(CD25反染)和细胞核分裂因子归纳。HD Treg与HD、SP或sp606这样的话者共同人才。(a,b) CFSE转化(a)和CFSE诱导花红(b)。(c,d) CD25诱导花红(c)和CD134诱导花红(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在五小中的的表达出来。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

得出结论：我们得出的得出结论是，来自较快成效子的活命化失忆CD4+Treg在GITR表达出来中的得到了扩展和丰富，强调了有利于研究成果Treg在1标准型白血病安全性有机体中的的异质性的必要性。

原文记事：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28